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分子蛋白平臺(tái)

Western Blot(蛋白免疫印跡)檢測(cè)

儀器型號(hào)

Hitachi Regulus8100,Sigma 300;Zeiss Gemini 300; Hitachi S4800;JSM-7800F;蔡司 Supra 55等

預(yù)約次數(shù):42651
新客專(zhuān)享:首單立減200元
測(cè)試收費(fèi):溝通
詳細(xì)介紹
 
項(xiàng)目介紹
 
1.簡(jiǎn)介:
     采用聚丙烯酰胺凝膠電泳,檢測(cè)物是蛋白質(zhì),將抗體作為探針,標(biāo)記的二抗作為顯色工具。經(jīng)過(guò)PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝 酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類(lèi)型及其生物學(xué)活性不變。
     以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的二抗發(fā)生反應(yīng),經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。
2.服務(wù)流程:
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樣本要求
 
1、新鮮樣品:1、0.1g新鮮組織(至少),干冰運(yùn)輸;
2、細(xì)胞:細(xì)胞類(lèi)型樣本細(xì)胞數(shù)為1*106以上),收集細(xì)胞后PBS清洗三遍,離心去除上清,干冰運(yùn)輸;
3、若客戶(hù)提供已提取的蛋白液,蛋白提取方法請(qǐng)參考:心肝脾腎等組織可每50~100mg加1ml裂解液,肺100~200mg加1ml裂解液。加入裂解液前,盡量將組織剪成小塊。
4、需提供待測(cè)樣品的一抗及其說(shuō)明書(shū)(一抗一般為10μl左右,也可由平臺(tái)代購(gòu));其他所涉及的細(xì)胞、試劑盒以及生物耗材均可由本平臺(tái)均有償提供。
 
常見(jiàn)問(wèn)題
 
question
1、Western blot為什么背景模糊?
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question 
2、樣品要如何準(zhǔn)備?
① 新鮮樣品:1、0.1g新鮮組織(至少)2、加入蛋白裂解液,干冰運(yùn)輸;
② 細(xì)胞:細(xì)胞類(lèi)型樣本細(xì)胞數(shù)為1*106以上),干冰運(yùn)輸;
③ 對(duì)于心肝脾腎等組織可每50~100mg加1ml裂解液,肺100~200mg加1ml裂解液。加入裂解液前,盡量將組織剪成小塊。
④ 需提供待測(cè)樣品的一抗及其說(shuō)明書(shū)(一抗一般為10μl左右,也可由平臺(tái)代購(gòu));其他所涉及的細(xì)胞、試劑盒以及生物耗材均可由本平臺(tái)均有償提供。
question
3、為什么條帶會(huì)出現(xiàn)彌散?
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